¿ Que es la espectrofluorometria ?

agosto 8, 2022by Kalstein
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La Espectrofluorometría, es la ciencia que se encarga de analizar la fluorescencia de una muestra. Dicha ciencia, es aplicada por un dispositivo llamado Fluorómetro, y es un instrumento el cual mide y estudia las propiedades de compuestos químicos, con el propósito de deducir información sobre los elementos luminiscentes.

Generalmente, las propiedades se pueden indagar en función de la agrupación de diferentes especies, y/o el entorno químico de la muestra, a través de análisis cuantitativos y cualitativos.

Dicho dispositivo, funciona a través de un haz de luz ultravioleta, que estimula los electrones de las moléculas de ciertos compuestos, e induce a  la emisión de luz de una menor energía, generalmente luz visible (aunque no necesariamente). 

Finalmente, tiene un sin número de aplicaciones prácticas, desde el simple parámetro fluorescente, hasta estudios en química analítica. En la naturaleza, hay variadas muestras de entidades que manipulan la fluorescencia y en especial la quimioluminiscencia, para atraer alimento o pareja, o bien para espantar a los depredadores.

Conceptualización de la Espectrofluorometría

Generalmente,  es la ciencia que estudia las especies que poseen estados electrónicos de interés, y un estado electrónico excitado de mayor energía. Dentro de cada uno, hay diferentes estados vibracionales. Para conocer los estados de la ciencia de la Espectrofluorometría, se hace a través de la estimulación de la muestra, mediante la absorción de un fotón de luz, desde su fase electrónica a uno de los distintos estados vibracionales. Dichos elementos, causan emisión y pierde la energía vibracional, hasta que se obtiene el cambio más bajo del período electrónico estimulado. Así pues, mediante el análisis de las diferentes frecuencias de luz emitida por la espectrofluorescencia, junto con sus intensidades relativas, se puede establecer la disposición de los diferentes niveles de vibración.

En la espectrofluorometría, se utilizan dos tipos generales de instrumentos:

  • Fluorómetro de filtro: el cual utiliza filtros para bloquear la luz incidente, y la luz fluorescente.
  • Espectrofluorómetro: son empleados para monocromadores de retículo de difracción, y aislar la luz incidente y la luz fluorescente.

Ambos tipos de instrumentos, utilizan proyectos de luz de una fuente de estimulación, que  pasa a través de un filtro o monocromador, e incide sobre la muestra de estudio.

Aplicaciones y Uso

La espectrofluorescencia, se utiliza en estudios bioquímicos, médicos, químicos, estudios ambientales, por ejemplo, en rastreo (hidrogeología) y de investigación de compuestos orgánicos. También, se ha aplicado para diferenciar los tumores malignos de piel de los benignos.

Los Fluorómetros, son los encargados de medir los cambios emitidos por las muestras. Hay dos tipos, los cuales, son: de emisión y excitación.

  • Para producir un espectro de emisión, se capta el espectro de luz para una longitud de onda de excitación dada.
  • Por el contrario, para producir un espectro de excitación, la luz emitida por luminiscencia, se observa a una longitud de onda dada, para diferentes longitudes de onda de excitación.

Los Fluorómetro, detectan concentraciones de moléculas fluorescentes tan bajas como 1/1,000,000,000 10-18 .

En síntesis, los espectrofluorómetros, normalmente aportan mayor comprensión y un nivel eficiente más amplio, detectan muchos procesos biológicos y químicos. A menudo, existen alternativas fluorescentes para aplicaciones, como viabilidad celular y cuantificación de ácidos nucleicos.

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